Source: http://www.jci.org/articles/view/16500/version/1

Intracelulară colesterol de transport

Maxfield Frederick R. şi Daniel Wüstner

Departamentul de Biochimie, Weill Medical College din Universitatea Cornell, New York, New York, Statele Unite ale Americii

Adresa de corespondenta la: Frederick R. Maxfield, Departamentul de Biochimie, în cameră E-215, Weill Medical College de la Universitatea Cornell, 1300 York Avenue, New York, New York 10021, Statele Unite ale Americii. Telefon: (212) 747-6405; Fax: (212) 746-8875; E-mail: frmaxfie@med.cornell.edu.

Publicat în 01 octombrie 2002

Distribuirea corectă intracelular al membranelor celulare, printre colesterolului este esential pentru multe functii biologice de celule de mamifere, inclusiv semnalizare şi de trafic cu membrană. Traficului intracelular joaca un rol major în etapa corespunzătoare a colesterolului internalizate şi în regulamentul de eflux colesterol. În ciuda importanţei de transport şi distribuţie de colesterol în interiorul celulelor pentru fiziologia normala si in conditii patologice, multe aspecte fundamentale de circulaţie colesterolului intracelulare nu sunt bine înţelese. De exemplu, rolurile relative ale transportului veziculoase şi nonvesicular nu au fost complet determinat, şi distribuţia asimetrică a colesterolului între cele două broşuri ale membranelor biologice este slab caracterizată, în multe cazuri. De asemenea, deşi este clar că mici, colesterol îmbogăţit microdomains (adesea menţionată ca plute;. Simons a se vedea şi Ehehalt, această serie de perspectiva, ref 1) apar in membranele biologice de multe, compoziţia, dimensiunea şi dinamica acestor microdomains rămân nesigur. Aici, vom discuta despre înţelegerea actuală a transportului colesterolului intracelular.

Distribuţia intracelular de colesterol

Organite membrana celulelor mamifere menţine proteine distincte şi compoziţii de lipide care sunt esentiale pentru functionarea lor corespunzatoare (figura 1). În calea secretorie biosintetice, colesterol este scăzut în reticulului endoplasmatic (ER), dar nivelul acesteia creşte prin aparatul Golgi, cu cele mai ridicate niveluri in membrana plasmatice (2). În calea endocytic, compartimentul de reciclare endocytic (CEC), care conţine proteine şi lipide de reciclare membrana (3), conţine, de asemenea un nivel ridicat de colesterol (4). Conţinutul de colesterol de la sfârşitul lui endosomes şi lizozomii nu este bine documentat, dar în condiţii normale pare a fi mai mici decât în CEC (2,4). In celulele epiteliale polarizate, membrana apicala este îmbogăţit în colesterol şi sphingolipids în raport cu membrana basolateral (5).

Mecanismele de bază de transport colesterolului între două membrane. (o) veziculoasă de transport. Acest proces necesită ATP, dar nu are nevoie de o schimbare în distribuţia transversală de colesterol în membrana donator. (b) Difuzarea prin citoplasma fie legat de o proteina de transport (săgeţi sus) sau prin difuzie liberă (săgeţile mai mici). Colesterolului în membrana donatoare trebuie să desorb din prospect citoplasmatic, astfel încât distribuţia transbilayer de colesterol poate afecta acest proces. (c) de transport în contact cu membrana. Donator adiacente şi membrane acceptor vin în contact apropiat, rezultând în colesterol shuttling în spaţiul intermembrane. Acest proces necesită colesterol în prospect citoplasmatice a membranei donator şi poate fi facilitată de proteinele de transport.

Deşi ER este site-ul de sinteza colesterolului, concentraţia de colesterol din ER este foarte scăzută, care cuprinde doar aproximativ 0,5-1% din colesterolului celular (6), chiar dacă suprafaţa ER depăşeşte pe cea a membranei plasmatice, în multe celule. Multe aspecte ale reglementării colesterolului sunt sub control strict şi de feedback-ul sunt sensibile la concentraţia de colesterol din ER. De exemplu, o creştere a conţinutului de colesterol din ER accelerează degradarea a 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A reductaza, enzima-cheie reglementate pentru sinteza colesterolului (7). Răspunsul steroli Elementul de proteina de legare (SREBP) scindarea-activarea proteine (SCAP) răspunde la reducerea colesterolului in membrana ER prin activarea clivajului proteolitic şi translocarea de un fragment de SREBP în nucleu, în cazul în care se modifică transcriere a mai multor gene implicate în regulament colesterolului (8). Astfel, concentraţia de sterol in membrana ER este crucială pentru homeostazia colesterolului celular.

Conţinutul de colesterol al aparatului Golgi este intermediar între cele ale ER şi a membranei plasmatice, dar conţinutul de colesterol măsurată a Golgi depinde de metoda utilizată pentru purificarea de aceste membrane (9). Electron studii microscopice filipin obligatoriu arată un conţinut de colesterol crescut de la cis - pentru a trans -Golgi (7). Acesta a fost propus ca salvare îmbogăţit în sphingomyelin, glycosphingolipids, şi forma de colesterol din aparatul Golgi şi faptul că aceste domenii sunt plută selectiv transportate la domeniul apical din trans -Golgi (5,10). Colesterolului în CEC este la fel de importantă pentru traficul de membrană corectă. Reducerile de colesterol celulare s-au dovedit a modifica reciclarea glicozil-fosfatidilinozitol-ancorat (GPI-ancorate) proteine (11).

Membranei plasmatice este estimată la aproximativ conţine 60-80% din totalul colesterolului celulare (2), şi a fost estimat că colesterol este la fel de mult ca 30-40% din moleculele de lipide in membrana plasmatice. În ciuda unor incertitudine şi de aceste cifre, este clar, din toate studiile că membranei plasmatice este puternic îmbogăţit, în raport de colesterol pentru a membranelor celulare alte.

Colesterolul bogate în microdomains

Colesterolul şi lipidele nu sunt uniform distribuite în cadrul bilayers membrană biologică. Colesterolul şi-sphingolipid îmbogăţit cu microdomains, care sunt rezistente la solubilizare la o temperatură scăzută de non-ionice, detergenţi, cum ar fi Triton X-100, au fost propuse pentru a juca un rol important în transportul colesterolului (5,10,12). Proprietăţile de lipide în detergent, rezistente la astfel de membrane (DRMs) sunt similare cu cele dintr-un lichid-ordonate (Lo), fază care a fost caracterizat în membranele model (13). Domenii Lo prezintă mobilitate mare laterală a lipidelor şi de ambalare strâns în centrul hidrofobe a membranei. Plute de salvare nu au fost observate în mod direct de microscopie optica în celulele vii, probabil, pentru că dimensiunile lor sunt sub limita de rezoluţie. Mobilitate ridicată laterală în domenii Lo şi dimensiunea redusă a plute in vivo (5) să se asigure că moleculele va întâlni limitele pluta frecvent şi care molecule individuale concediu regiuni raftlike în câteva secunde.

Un procent ridicat al membranei plasmatice de multe tipuri de celule se găseşte în domenii raftlike; aproximativ 70-80% din suprafaţa de mai multe tipuri de celule a fost dovedit a fi rezistente la solubilizare de frig Triton X-100 (14). Studii de fluorescenţă polarizare, de asemenea, indica faptul ca aproape jumatate din membranei plasmatice este în domenii ordonat la 37 ° C, în conformitate cu concentraţie mare de colesterol şi sphingolipids in membrana plasmatice. In celulele epiteliale polarizate, sphingolipids şi a colesterolului sunt mai ales îmbogăţit în domeniile membrana apicale, care poate exista aproape în întregime într-o stare ordonate (5).

Distribuţia cantitativă a colesterolului între domenii ordonate şi dezordonate în membranei plasmatice nu este cunoscută. Având în vedere concentraţia mare de colesterol total în cadrul membranei plasmatice, doar un grad mic de îmbogăţire locale pot fi posibilă fără a perturba structura bistratificat. Mai degrabă, membrana de plasma poate fi menţinută la o compoziţie în care mici modificări de conţinut de colesterol poate determina modificări mari în fluiditate membrana, astfel cum a fost văzut în membranelor model (14).

Cel mai probabil, mai multe tipuri de microdomains membranei coexistă în celule (14). Caveolae sunt un tip de domeniu de specialitate, raftlike. Ele sunt asociate cu caveolins, şi au o formă caracteristică balon cu un diametru de aproximativ 60 nm. În cele mai multe celule, caveolae acopere câteva procente a membranei plasmatice, astfel încât acestea reprezintă o mică parte din DRMs membranei plasmatice. În anumite circumstanţe, poate prindeţi caveolae off de la membranei plasmatice (15), dar în condiţii standard cultura de tesut, plasma membrana caveolae nu schimb rapid cu bazine de caveolin interne (16). Caveolins poate lega de colesterol (17), dar, ca şi în alte domenii raftlike, îmbogăţirea relativă a colesterolului în caveolae este incert.

În plus faţă de separarea laterale ale membranelor în diverse domenii, cele două broşuri ale membranelor biologice au compoziţii distincte. Mecanisme pentru menţinerea o distribuţie asimetrică a colesterolului nu sunt bine intelese, ci un mecanism de probabil este că distribuţia de colesterol este în mare măsură determinată de alte lipide in membrana. În general, distribuţia transbilayer de colesterol în membranele biologice, altele decât membranei plasmatice nu este bine caracterizat, şi chiar în membranei plasmatice există o anumită incertitudine. Unele studii au indicat faptul că sterol este predominant în prospect exterior al membranei plasmatice (18), care ar fi în concordanţă cu o asociaţie preferenţial cu sphingomyelin (13). Cu toate acestea, alte câteva studii au indicat faptul ca colesterolul este îmbogăţit în prospect citoplasmatice (2,19), deşi baza moleculara pentru o astfel de îmbogăţire este necunoscut.

Metode pentru studiul de transport şi distribuţie colesterolului

Incertitudinea în ceea ce priveşte distribuţia de colesterol din prospectele interioare si exterioare ale membranei plasmatice este un exemplu de dificultate mai generale de a cuantifica acest lucru şi multe alte specii de lipide în membranele biologice intacte. În acest caz, deoarece nici o măsură directă de colesterol este fezabilă, distributii transbilayer de colesterol sunt determinate de emisie de stingere din steroli fluorescente care quenchers membrană impermeant. Această abordare nu este ideală, în parte datorită faptului că pot exista diferenţe cantitative în proprietăţile analogilor colesterol fluorescent în comparaţie cu colesterol (vezi mai jos).

Poate că cea mai mare dificultate serioasă de analiză cantitativă a colesterolului in membrane este faptul că, deşi colesterol este slab solubil în apă, se poate desorb spontan de la membranele la o rată apreciabilă. Cel mai adesea se va reveni la acelaşi membrana, dar se poate lega, de asemenea, la orice alte site-uri hidrofobe obligatorii sunt disponibile. Din acest motiv, o parte semnificativă a colesterolului membrana poate redistribui între organite izolate (20). În celule, proteine solubile pot lega colesterolului, uneori cu specificitate şi afinitate crescută (21,22). Astfel de proteine poate medieze, de asemenea, transferul de colesterol între membrane in vitro după întrerupere de celule (22).

Transport şi distribuţie de colesterol nou fib-dimensiuni pot fi determinate prin introducerea ³ H-acetat în celulele vii şi măsurarea cantităţii de ³ colesterol H în membranele izolate la momente diferite. Colesterol marcat radioactiv şi esteri de colesterol pot fi livrate de lipoproteine, colesterol şi etichetate pot fi, de asemenea, livrate prin intermediul transportatorilor ciclodextrină specifice, cum ar fi metil-β-ciclodextrina. Colesterolului total poate fi măsurată prin metode chimice directe, cum ar fi cromatografia de gaze-spectrometria de masă sau prin metode indirecte, cum ar fi teste bazate pe oxidaza colesterolului (2,23). Pentru oricare dintre aceste metode de măsurare a colesterolului de transport şi de distribuţie care urmează să fie utilizate, organite diverse de interes trebuie să fie purificate. În general, este destul de dificil de a obţine fracţiunile extrem de purificat membrana, astfel încât posibilitatea unor efecte de la membrane contaminante trebuie să fie luate în considerare. În plus, protocoalele de lungă durată de purificare poate creşte riscul de transfer de colesterol. Aceste metode sunt mai utile atunci când organite pot fi uşor separate, după cum cu ER şi a membranei plasmatice, dar ele pot fi foarte greu de interpretat, cum ar fi atunci când organite endosomes şi membrane Golgi sunt luate în considerare.

Unul dintre instrumentele cele mai utilizate pe scară largă pentru a studia de distribuţie colesterolului intracelular este filipin detergent fluorescente, care se leagă selectiv de colesterol (şi nu la esterii colesterolului) (24). Filipin colorare pot fi folosite pentru a detecta colesterolului în organite diferite în membrana celulelor intacte. Deşi este un filipin fluorophore relativ slabă, aceasta este detectată cu uşurinţă de către camerele de răcire dispozitiv de încărcare-cuplate. În general, filipin a fost folosit pentru analize calitative de distribuţie colesterol, deoarece intensitatea fluorescenţei nu este neapărat linear legate de conţinutul de colesterol. De exemplu, există diferenţe în accesibilitatea de colesterol în piscine diferite (25). O altă limitare este faptul că ar putea să redistribuie colesterolului în timpul incubarea lung cu filipin. Astfel, cuantificarea distribuţiei colesterolului intracelular de experimente folosind filipin nu este posibilă, deşi distribuţiile colesterolului observate cu filipin sunt, în general, în conformitate cu distribuţiile obţinute prin alte metode. Când filipin se leagă de colesterol în membrane, aceasta produce un cucui caracteristică în membrana care poate fi văzut în congela-fractura micrographs. Ca şi în cazul studiilor de fluorescenta, microscopie electronica de filipin a fost utilă pentru analiza calitativă a distribuţiei colesterolului.

Derivaţi mai multe fluorescente de colesterol au fost utilizate în studiile de microscopie de fluorescenta. O problemă majoră cu aducti fluorescente de colesterol este că fluorophore poate schimba foarte mult proprietăţile de colesterol, astfel încât distribuţia acesteia între membranelor celulare este modificat drastic (9). O steroli puţini sunt intrinsec fluorescente şi au proprietăţi laterale şi transbilayer de distribuţie în membrane care sunt destul de similare cu colesterol. Una dintre acestea, dehydroergosterol (DHE), este un sterol natural, produs de drojdie (26). Deşi este un rapid photobleached, fluorophore slab cu emisie în ultraviolet apropiat (UV), DHE poate fi încorporat în membranele celulare, în concentraţii suficiente pentru a fi observate cu UV-sensibile din punct de camere de dispozitiv de încărcare-cuplate (4,9,27). DHE a fost de asemenea utilizat într-un studiu de imagistică multiphoton (26). Există probleme importante care trebuie luate în considerare în validarea DHE sau steroli alte intrinsec fluorescente ca analogii colesterol. DHE distribuie în mod similar la colesterol în celule (4,9,27), dar există diferenţe cantitative, de exemplu, în rata de desorbţie din membranele lipidice modelul (28). Astfel, pot exista diferenţe cantitative în transportul de DHE în comparaţie cu colesterol. Proprietăţile fluorescenţa de DHE sunt, de asemenea, sensibile la mediul local, astfel încât intensităţile relative fluorescenta în membranele diferite pot să nu reflecte cu acurateţe concentrare completă. Cu toate acestea, aceşti reactivi oferă avantajul semnificativ că acestea pot fi folosite pentru a observa în mod direct redistribuire sterolului în celulele vii. DHE pot fi livrate la membrana plasmatica prin intermediul unui operator de transport metil-β-ciclodextrina în impulsuri cât mai scurt de 1 minut, şi redistribuirea pot fi observate şi cuantificate în puls-Chase studii (4,27). Fotooxidare de DHE poate fi de asemenea utilizat pentru a profita de fotooxidare o regiune de o celulă de măsurare şi apoi rata la care se întoarce fluorescenţei ca schimburile nealbite DHE în zona de albit (4,9,27).

Unele tehnici de specialitate, cum ar fi testul oxidazei colesterolului (23), au fost dezvoltate pentru a cuantifica colesterol în membranei plasmatice. Acest test va supraestima cantitatea de colesterol de pe membrana plasmatice în cazul în care enzima câştigurile accesul la compartimentele intracelulare (de exemplu, prin endocytosis in celulele vii sau prin ruperea membranelor) sau în cazul în care se mută de colesterol pentru a membranei plasmatice în timpul testului. Cu toate acestea, o modificare a acestei abordări, concepute pentru a minimiza aceste probleme (2), oferă date estimative de fracţiunea de colesterol celulare de la nivelul membranei plasmatice (aproximativ 70%) care sunt în acord general cu alte metode. O altă metodă utilă pentru a cuantifica livrare colesterol pentru a membranei plasmatice este de extracţie de ciclodextrină extracelulare (29,30). Acest acceptor colesterol selectiv se poate elimina, cel puţin un bazin de colesterol din membrana intr-un minut sau cam asa ceva. În astfel de experimente de eflux, celulele sunt echilibrate cu ³ H-colesterol înainte de a adăuga ciclodextrine extracelular. Extracţie de colesterol este de obicei etichetate bifazică, cu o componentă lentă de extracţie care necesită zeci de minute (30). Este probabil ca o mare parte din faza lentă este livrare de la organite interne (4), dar este posibil că există, de asemenea, o piscină încet extractibile în membranei plasmatice (30). O încet extractibile în piscină membranei plasmatice ar putea duce la incertitudine în estimările de fracţiunea de colesterol la membrana plasmatica prin această metodă.

O metodă enzimatică schimbare de densitate, care a fost folosită pentru a determina dacă proteinele sunt, în acelaşi compartiment a fost adaptat pentru determinarea valorii relative a ³ H-colesterol in organite (4). Atunci când peroxidază de hrean (HRP) catalizeaza peroxidare a diaminobenzidine, un polimer insolubil este format în organelle care creează o creştere foarte mare a densităţii sale. Organite care conţin produsul HRP-catalizate de reacţie pot fi separate rapid de la alte componente celulare prin centrifugare. HRP pot fi livrate la endosomes de cuplare a unei proteine, cum ar fi transferina. Potrivit unor studii utilizând această procedură, aproximativ 35% din colesterolului celular se găseşte la începutul anilor endosomes, inclusiv CEC (4). HRP poate fi, de asemenea, direcţionate spre organite pe calea secretorie biosintetice prin exprimarea construieşte codare proteine himeric care conţin HRP şi un ER sau Golgi proteine (31). Această metodă este supusă la preocupările legate de redistribuirea de colesterol în timpul testului, dar oferă un mod rezonabil, rapid şi uşor pentru a obţine izolarea relativ curat de o organelle.

In timp ce multe metode au fost dezvoltate pentru a măsura de distribuţie colesterol în celule, toate acestea sunt supuse la diferite grade de incertitudine în interpretarea lor. Prin urmare, este necesar să se compare rezultatele obţinute prin metode diferite, în scopul de a obţine o analiză fiabilă a distribuţiei colesterolului intracelular.

Mecanisme pentru transportul de steroli intracelulară

O altă mare provocare în studierea transportul colesterolului intracelular este faptul că mai multe mecanisme fundamental diferite pentru a muta steroli funcţioneze simultan în celulele vii (Figura 1). Acţiunea combinată a acestor căi se poate face greu pentru a obţine o înţelegere clară de ansamblu a transportului colesterolului.

Colesterolul poate fi încorporate în vezicule de transport sau nivelul tubilor care transporta constitutive de membrana de la un nucleu la altul. Inhibarea farmacologice pot fi folosite pentru a testa importanţa diferitelor etape traficului de membrană. De exemplu, implicarea aparatului Golgi pot fi testate folosind brefeldin A, care cauzează membranele Golgi pentru a deveni contopite într-ER (32). Microtubule-mediată de circulaţie de vezicule pot fi testate cu ajutorul agenţilor nocodazole sau de altă natură care perturba microtubuli (32). Exprimarea proteine dominante inhibitor poate fi, de asemenea, utilizate pentru a evalua rolul de trafic veziculelor. De exemplu, exportul de colesterol sau DHE de la CEC (Figura 2) necesită ATP şi pot fi blocate prin expresia de o forma mutanta a unei proteine CEC-asociate, RME-1 (4).

De transport în celule nonpolarized colesterolului. LDL colesterol care transportă şi CE (colesterolul esterificat) este transportat (o) de la sortarea de endosomes (SE) la endosomes tarziu (LE) şi lizozomii (Ly), din care colesterol poate eflux şi de a ajunge membranei plasmatice sau ER, în cazul în care acesta devine interesterificate (b). Eflux de la LE şi Ly este slab caracterizată, aşa cum este indicat prin linii punctate. Colesterolul poate trece de la membranei plasmatice a CEC de către un nonvesicular, ATP-independent de proces (c). În schimb, reciclarea de colesterol apare aproape exclusiv in vezicule care, de asemenea, a altor markeri de reciclare (d). De novo colesterol sintetizat este cea mai mare parte transportat de la ER direct la membranei plasmatice, ocolind aparatul Golgi (f), dar unele urmează calea secretorie biosintetice din ER la TGN (e). Excesul de colesterol (Ch), în ER devine esterificate (CE) şi depozitate în picături lipidice citoplasmatice (D).

Deoarece colesterol poate desorb de membrane, la o rată semnificativă şi celule au multe posibililor purtători de colesterol in citoplasma, transportatorul mediată de difuzie poate juca un rol important în transportul de colesterol în rândul membranelor celulare (figura 1). De transport Nonvesicular este important pentru transportul de steroli membranei plasmatice a CEC (4) (Figura 2), precum şi pentru livrarea de colesterol pentru a membranei mitocondriale interior în celule steroidogene (22). Transportatorii colesterol ar putea consta dintr-un număr mare de proteine citosolice fiecare cu afinitate slabe şi a specificităţii pentru colesterol. Alternativ, transportatorii ar putea fi proteinele specializate de transport colesterolului. O familie de înaltă afinitate lipidelor si sterolilor transportatorii au fost identificate, dintre care unul dintre prototipuri este proteina steroidogene acută de reglementare (StAR/StarD1) (21), ale căror lipide sau sterol-obligatoriu domenii sunt numite STAR legate de transferul de lipide (START) domenii. StAR/StarD1 a fost implicat în furnizarea de colesterol pentru a mitocondriale citocromului P450 în celulele steroidogene (ref.22 ; a se vedea, de asemenea, Jefcoate, această serie de perspectiva, ref.33). Există acum mai mulţi membri de familie cunoscute, dintre care unele s-au dovedit că se leagă cu afinitate mare de colesterol. Expresie a unuia dintre acestea, StarD4, este reglementată printr-un nivel de sterol celular (34). Interesant, un alt membru al familiei, MLN64, are un domeniu transmembranar care se localizează la endosomes târziu şi un domeniu START, care se leagă de colesterol (35). Nu se ştie dacă funcţia principală a acestor proteine domeniu START este steroli şi lipide de transport sau dacă acestea sunt în principal proteine de reglementare.

Difuziune steroli proteine de legare oferă un mecanism rapid pentru shuttling colesterol între membrane, dar baza de specificitate in membrana de direcţionare nu este cunoscută. O posibilitate este că aceşti factori sunt direcţionate către compartimentele anumitor prin legarea de proteine sau lipide care sunt îmbogăţite în aceste compartimente. Deşi se pare că există mecanisme specifice de direcţionare, un model alternativ constată că transportatorii difuziune distribuie steroli, printre toate membranele posibilă ţintă, cu îmbogăţire relativă în organite diferite determinate de capacitatea de a membranelor pentru a servi drept acceptoare de steroli. În susţinerea modelului din urmă, rata iniţială de transfer de colesterol între organite izolate din fibroblasti pare a fi determinată în mare măsură de caracteristicile a membranei acceptor (20). Mai mult decât atât, DHE pe un operator de transport ciclodextrina a fost găsit pentru a fi livrate preferential la CEC, nu numai în celulele vii, dar chiar şi în permeabilized, formaldehida-fix celule (4), în concordanţă cu ideea că acest proces este independenta de energie şi rezultă din proprietăţile intrinseci ale membranelor ţintă.

Un alt mijloc de a facilita transportul de la o membrana la alta este de a avea un contact strâns între cele două membrane. De exemplu, în multe tipuri de celule, o parte din ER este în imediata apropiere a membranei plasmatice (36), un acord care ar putea facilita schimbul rapid de colesterol între aceste două membrane, probabil cu ajutorul de proteine de transfer. În mod similar, tri-dimensională de reconstrucţii ale aparatului Golgi au relevat zone întinse de apoziţie strânsă între trans -Golgi şi ER (37). ACAT colesterol-esterifying enzima este îmbogăţit în părţi ale ER în apropiere de CEC şi de trans -Golgi (38), poate să permită furnizarea eficientă de colesterol pentru a ACAT din aceste membrane bogate în colesterol.

Caveolae caveolin şi au fost propuse pentru a juca un rol important în transportul colesterolului intracelular. În fibroblaste de cultură, reducerea în expresie caveolin de antisens ADN suprima eflux colesterol, întrucât transfectia cu ADNc caveolin stimulează acest proces (39). Mecanismele prin care caveolin-ar putea afecta transportul colesterolului rămân incerte, deşi caveolin poate lega direct de colesterol (17). Acesta a fost propus ca caveolin formează un complex cu proteine insotitor care ofera colesterolului din ER pentru a membranei plasmatice, ocolind aparatul Golgi (40). Palmitoylation de caveolin-1 poate fi necesară pentru rapidă (t _{1 / 2} = 10 minute) transferul de colesterol din ER la caveolae prin intermediul acestui complex insotitor (40). Cu toate acestea, unele studii nu au reuşit să găsească dovezi că acest complex Chaperone colesterol participă la livrare suprafaţă de colesterol nou sintetizate (32), şi câteva limitări trebuie să fie rezolvate cu privire la contribuţia de caveolin pentru transportul colesterolului. Astfel, cel puţin în culturile de celule, rata de caveolin flux între interiorul celulei şi a membranei plasmatice este de obicei destul de redus (16). În plus, soareci lipsit de expresie, cât caveolin-1 şi caveolin-2 (41,42) par a fi normale în ceea ce priveşte nivelul lor de colesterol şi de regulament, deşi un studiu complet de transport colesterolului in aceste soareci nu a fost încă raportate.

Un rol mai indirect pentru caveolins şi alte proteine conexe a fost propus în care a crescut acumularea de caveolin-1 din ER promovează interacţiunea acestuia cu picături de lipide nou format (43). Se sugerează că topologia membrana de caveolin, care are două domenii adiacente citoplasmatice-o regiune centrală care pătrunde, dar nu traversează bistratificat, s-ar putea permite să se asocieze preferential cu deformările membrana care apar în timpul formarea unei picaturi lipidice. Interesant, o familie de proteine vegetale asociate cu picături lipidice, oleosins, au o topologie asemanatoare cu caveolins. Prin urmare, caveolins şi proteine conexe pot modifica structura bistratificat membrana, membrana promovarea curbură, şi facilitarea poate redistribuirea transbilayer de colesterol.

General căi intracelulare de transport

De transport la şi de la ER. Deoarece ER este site-ul a sintezei colesterolului, dar menţine un nivel scăzut la starea de echilibru la nivel de colesterol, mecanisme eficiente de transport trebuie să existe pentru a exporta colesterolului din ER (Figura 2). Export colesterol din ER necesită energie metabolică (2). Măsurată prin extragerea de colesterol, la sosirea la membranei plasmatice cu ciclodextrina, cinetica sale de transport pare a fi bifazică (29), cu o prima faza, ceea ce corespunde la aproximativ jumătate din total, ajungând la membranei plasmatice în 60 de minute, iar materialul restul fiind lansat într-o fază lentă, timp de 5-6 ore (29).

Vezicula-mediată calea secretorie de proteine prin aparatul Golgi ar putea, în principiu, să ofere un traseu paralel pentru nou-sintetizate de colesterol pentru a membranei plasmatice. Studiile biochimice au demonstrat că acest lucru nu este o cale majoră de transport colesterolului din ER pentru a membranei plasmatice. Brefeldin Un tratament poate suprima cantitativ de transport de suprafata celulelor de proteine stomatită veziculoasă G virusului fără blocarea transportului colesterolului (44). Totuşi, deşi această rută a porcului nu este o cale majora de export colesterol, un studiu recent a constatat că unele colesterol exportat din ER devine limitat la DRMs înainte de a ajunge membranei plasmatice şi că transportul de colesterol pentru a membranei plasmatice poate fi parţial inhibate de brefeldin A (32). Trecerea unor colesterol prin aparatul Golgi ar putea fi important pentru plute dependente de sortare în trans -Golgi reţea (TGN) a polarizat epitelii (5). În plus, epuizarea energiei sau tratamente care interfera cu trafic vezicula au fost găsite pentru a reduce esterificare a β-VLDL-derivate din colesterol în macrofagele într-o etapă după eliberarea de colesterol din endosomes târziu şi lizozomii (45). Cu toate acestea, tratamentul cu celule sphingomyelinase bacteriene, care elibereaza colesterolului din membrana de plasma, duce la esterificare colesterolului ATP-independent şi este însoţit de o vezicule ATP-independent al membranei plasmatice (45,46). Se pare astfel că mecanismele atât veziculoase şi nonvesicular funcţionează pe tot parcursul procesului de transport colesterolului.

Export de la sfârşitul anului endosomes şi lizozomii. esterii colesterolului în lipoproteine LDL si alte hidrolizat la colesterol gratuită în endosomes târziu şi lizozomii. Colesterolul este exportat din lizozomii printr-un mecanism care nu este pe deplin caracterizat (Figura 2). De transport de la lizozomii la ER sau membrana de plasma poate fi inhibată de amine progesteron sau hidrofobe, cum ar fi U18666A, imipramina, sphinganine, şi stearylamine (2), dar această inhibare nu pare să fie în pas de export de la sfârşitul endosomes şi lizozomii, deoarece LDL-colesterol derivate apare la nivelul membranei plasmatice similare cu cinetică în celulele tratate şi netratate (47). După eflux de la sfarsitul anilor endosomes şi lizozomii, colesterol pot fi livrate la diverse alte organite. Acesta a fost estimat că în fibroblaştii aproximativ 30% a colesterolului LDL-derivat este livrat la ER fără tranzitarea membranei plasmatice (2,29).

Niemann-Pick Boala C este o afectiune ereditara caracterizata prin acumularea recesiva de colesterol si alte lipide în organite care au în comun multe, dar nu toate caracteristicile endosomes târziu (7,48). Niemann-Pick C1 (NPC1), proteine este un multiplu-membrana-spanning proteine, care nu transportă colesterolul în mod direct, dar care poate facilita transportul transbilayer unor molecule hidrofobe (49). Nu este clar la ce etapa sau etapele NPC1 acte de proteine, dar, după cum cu progesteron sau amine hidrofobe, se pare că iniţială de export de la sfârşitul lunii endosomes nu este afectată; colesterol luate în celule, ca iese ester LDL-asociată cu întârziere şi endosomes apare la nivelul membranei plasmatice de colesterol liber in acelasi ritm in de tip sălbatic şi NPC1 celule mutante (47,50). Cu toate acestea, colesterol în cele din urmă se acumulează în organite de stocare care se aseamana cu întârziere endosomes şi sunt îmbogăţite în acid lysobisphosphatidic (48) si de alte lipide (7). Temei pentru această acumulare de colesterol şi lipide în NPC1 mutanti sau în celule tratate cu amine hidrofobe rămâne incertă.

Eflux din membrana de plasma. S-au înregistrat progrese considerabile în ultimii ani în înţelegerea mecanismelor de eflux colesterol de receptorii extracelulare (a se vedea Tall et al., această serie de perspectiva, ref. 51). Proteina care este defect în Tangier boala, ABCA1, joacă un cheie, dar rolul indirect, în eflux colesterol de receptorii HDL (12). Se pare că rolul specific al ABCA1 este de a facilita transferul de fosfolipide la apoA-I. Colesterolul poate fi apoi effluxed la fosfolipide-încărcate apoA-I printr-un mecanism care nu are nevoie de ABCA1 (52). Rolul de specializări în membrană de eflux colesterol este o zonă activă de anchetă. Caveolae au fost descrise ca fiind site-uri importante pentru eflux, dar nu este clar dacă acestea au fost diferenţiate de alte tipuri de, mai abundent de membrane raftlike (12). Interesant, celulele exces ABCA1 transporta proeminenţe plasmatice membrana (53), care pot juca un rol în facilitarea transferului fosfolipide şi colesterol.

De transport intracelulare de colesterol din celule specializate

Colesterol de transport hepatică. resturilor chylomicron şi în alte tipuri de lipoproteine sunt preluate de către hepatocite folosind o varietate de receptori (54). După hidroliză de esteri de colesterol, fara colesterol este eliberat în celula în care acesta poate fi shuttled direct la membrana canalicular pentru secreţia biliară, utilizat pentru sinteza de săruri biliare, sau re-esterificate şi utilizate pentru asamblarea de VLDLs în ER (55). VLDL asamblate este secretat la membrana basolateral de hepatocite si transporta colesterolul în ţesuturile periferice (56).

Căi intracelulare de traficul de colesterol în hepatocite şi alte epiteliul sunt slab definite. În plus faţă de căi disponibile în celule nonpolarized, celule epiteliale menţine compoziţii distincte lipide şi proteine în apical lor şi membrane basolateral plasmă, care necesită sortare specializate în calea secretorie biosintetice şi în căile endocytic reciclare (3,57) (Figura 3). Rapid, schimbul nonvesicular de DHE între domeniile apical si basolateral membranei plasmatice a fost observată în hepatom HepG2 polarizat linie de celule, care formează un vacuole apicale asemănătoare biliare canaliculus (27). DHE este transportat in vezicule la un compartiment subapical sau compartiment de reciclare apical (SAC / ARC), sugerând că colesterol derivat din membrana plasmatica a celulelor hepatocytic are acces rapid la diferite compartimente intracelulare.

De transport colesterolului în celulele polarizate. Celulele polarizat formă distinctă apical (roşu) şi basolateral (albastru) compartimente membrană, care sunt separate prin intersectii strans (TJ). Proteinele si lipidele sunt sortate de-a lungul biosintetică şi căile endocytic indicate de albastru (basolateral) şi (apicale), vezicule rosii. Plasma colesterolului membrana este transportat în vezicule între membrana basolateral şi apical prin intermediul unui compartiment subapical sau compartiment de reciclare apical (SAC / ARC). Reciclarea a membranei basolateral pot să apară, de asemenea, de la acest compartiment (una). LDL colesterol are aceeaşi soartă ca şi în celulele nonpolarized (b). O fracţiune de colesterol de novo sintetizat este transportat de-a lungul calea biosintetice ca in celulele nonpolarized. În TGN, colesterolul ar putea forma microdomains sau plute, împreună cu sphingolipids care separă din membrana TGN rămase şi transporta proteine şi lipide apical destinate să membrana apicala se arată în roşu (c). Vezicule Basolaterally destinate (albastru) bud off al TGN, dar ar trebui să conţină mai puţin colesterol (d). Colesterolului plasmatic membrana poate de transfer rapid între domeniile membranei plasmatice de transport nonvesicular. Acest proces implică migrare rapida transbilayer de colesterol pentru a eluda bariera de difuzie laterală creat de TJ în prospect exoplasmic a membranei plasmatice. De transport prin citoplasma legat la un operator de transport de proteine (e), şi / sau difuzarea de-a lungul monostratul interior (f), rezultat în schimbul rapid de colesterol între domeniul apical si basolateral membranei plasmatice. Formarea CE apare ca in celulele nonpolarized, dar este omis pentru claritate.

De transport colesterolului în macrofagele. Întrucât încărcarea de esteri de colesterol în picături citoplasmatic a macrofagelor este un pas în formarea precoce a leziunilor aterosclerotice, transportul intracelular de colesterol şi de aceste celule este de mare interes (58). Multe dintre căile de transport sunt similare cu cele gasite in alte celule. În macrofagele, soarta intracelulară de colesterol derivat din lipoproteine depinde de mecanismul care stau la baza internalizarea acestuia. LDL este internalizat de receptorilor LDL si livrate pana la sfarsitul lui endosomes, în cazul în care esterii colesterolului sunt hidrolizat; downregulation homeostatice a receptorilor LDL limitelor de livrare colesterolului total din această sursă, şi a picăturilor de colesterol lipide de ester nu se acumulează în aceste celule. În contrast, colesterol livrate prin intermediul β-VLDL, care, de asemenea, se leaga de receptorul LDL, devine esterificat prin ACAT şi depozitate în picături citoplasmatic, probabil pentru că o sarcină mai mare de colesterol este livrat de către mai mari β-VLDL particule. Oxidat sau LDLs acetilat introduceţi prin intermediul receptorilor de măturător de stradă şi, de asemenea, stimulează formarea de picături de ester colesterol, LDL oxidat, deşi este mult mai puţin eficace în activarea acestui proces (59). LDL agregate şi păstrate la ECM nu devine internalizate de către receptor-mediată de endocytosis, dar rămâne în contact prelungit cu extracelulară macrofage, în acest caz, de livrare a colesterolului asociate precede internalizarea şi degradare a proteinelor (60). Această interacţiune, care seamănă cu situaţia din leziunilor aterosclerotice, de asemenea, duce la stimularea semnificative de esterificare colesterolului (58).

Gradul de esterificare colesterol de către macrofage depinde într-un mod non-linear cu privire la cantitatea de colesterol de încărcare (61), astfel încât esterificare mult mai mult are loc o dată de încărcare valoarea prag este depăşită. Baza pentru acest răspuns neliniar nu este pe deplin înţeles, dar o componentă a acestuia poate fi livrarea mai eficientă a colesterolului la ACAT în ER atunci când colesterol este peste pragul. O relaţie similară neliniare dintre cota membranei plasmatice de colesterol şi nivelul de colesterol în ER a fost găsit în fibroblaste (6), şi o astfel de relatie ar fi în concordanţă cu efectele observate în macrofagele ca colesterolului este ridicat.

De transport colesterolului în celulele steroidogene. Colesterolul este precursor pentru sinteza de hormoni steroizi in mitocondrii de ţesuturi gonadale si glandele suprarenale. Sinteza este iniţiat de conversie a colesterolului în pregnenolon prin clivaj C27 lanţul de colesterol partea citocromului P450, situat in membrana interioara mitocondriale. Livrarea de colesterol este rata de-a se limita la acest proces (21). Colesterol destinate pentru sinteza hormonilor steroizi este în principal derivate din membrana de plasma si de la picături de lipide. Cum colesterolul ajunge la suprafaţa exterioară a mitocondriilor nu este încă definită, dar mecanismele nonvesicular de transport prin intermediul proteinelor transportoare sau prin intermediul contactelor între membrana picaturi de mitocondriile şi lipide sunt susceptibile de a fi important (de62,63). Se presupune că, în general, pas rata de limitare în steroidogenezei este translocaţie de colesterol de la exterior la interior membranei mitocondriale, şi mai multe proteine au fost propuse să medieze acest pas de transport, inclusiv a receptorului periferice de tip benzodiazepinele, care se leagă de colesterol şi alţi compuşi cunoscuţi pentru a stimula steroidogenezei (64). StAR/StarD1 este gandit pentru a acţiona selectiv la suprafaţa exterioară mitocondriile să medieze de import de colesterol (refs.65,66 ; a se vedea, de asemenea, Jefcoate, această serie de perspectiva, ref.33, pentru o viziune alternativă), dar mecanismul exact de import colesterol STAR indusă în mitocondriile nu este cunoscută.

Observaţii finale

Distribuţia intracelular de colesterol unesterified între organite celulare diferite este determinat prin mecanisme multiple, inclusiv transbilayer flipping, stabilizare în microdomains membrana de interacţiunile cu lipide (şi, probabil, proteine), de îmbogăţire sau excluderea din vezicule de transport în care acestea constituie, şi legarea de proteinele de transport de difuziune în citoplasma şi în cadrul organite intracelulare. Unele dintre aceste mecanisme de transport implică mişcarea pasivă de colesterol în jos pe o pantă de liber-energie, dar altele necesita energie metabolică pentru a depăşi barierele cinetică sau pentru a vă deplasa în sus pe o pantă de colesterol. Transportul colesterolului de la un nucleu la altul poate fi realizată prin combinaţii ale acestor mecanisme, care funcţionează în paralel în cadrul celulei. Mecanismele şi reglementare a căilor rezultate, complexe sunt în continuare doar parţial înţelese. Progresele ulterioare vor necesita o mai bună înţelegere a căilor de transport, inclusiv o descriere cinetice şi morfologice ale mişcării de colesterol, precum şi o descriere mai completă a proteinelor care controleaza evenimentele-cheie în diverse cai.

Serviciul de date

Vezi lista de lecturi Serviciul de

Mulţumiri

Suntem recunoscatori Timotei McGraw şi Hao Mingming pentru lectură a manuscrisului. Această lucrare a fost sustinuta de subventii de la NIH (DK-27083) şi Ara Parseghian Medical Research Foundation. D. Wüstner este susţinută de o bursa post-doctoral de la Charles H. Revson Foundation. Limitărilor de spaţiu interzis referire la un număr de studii importante. Referinţe suplimentare pot fi gasite in lista de lectură a sugerat disponibile la www.jci.org/cgi/content/full/110/07/891/DC1.

Note de subsol

Conflict de interese: Nu există niciun conflict de interese a fost declarată.

Nestandarte abrevieri utilizate: reticulului endoplasmatic (ER); compartiment de reciclare endocytic (CEC); răspuns sterol element de proteina de legare (SREBP); SREBP scindarea-activarea proteine (SCAP); detergent rezistent la membrana (DRM); lichid-ordonate (Lo) ; dehydroergosterol (DHE); ultraviolete (UV); peroxidază de hrean (HRP); steroidogene proteine acută de reglementare (STAR); STAR legate de transferul de lipide (START), trans-Golgi de reţea (TGN); Niemann-Pick C1 (NPC1).

Referinte

1. . Simons, K, Ehehalt, R. colesterol, plute de lipide, si boala J Clin Invest 2002. 110: 597-603. doi: 10.1172/JCI200216390.Vezi acest articol prin: JCI.org PubMed
2. Liscum, L, Munn, NJ. Transportul colesterolului intracelular. Biochim Biophys Acta 1999. 1438: 19-37.Vezi acest articol prin: PubMed
3. Mukherjee, S, Ghosh, RN, Maxfield, FR. Endocytosis. Physiol Apocalipsa 1997. 77: 759-803.Vezi acest articol prin: PubMed
4. Hao, M, et al. De transport steroli veziculoasă şi non-porcului în celulele vii. Compartimentul de reciclare endocytic este un Depozit de steroli majoră organelle. J Biol Chem 2,002. 277: 609-617.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
5. Simons, K, Ikonen, plute E. funcţională în membranele celulare. Natura 1997. 387: 569-572.Vezi acest articol prin: CrossRef
6. Lange, Y, Ye, J, Rigney, M, Steck, TL. Regulamentul de colesterol reticulului endoplasmatic de colesterol membranei plasmatice. J lipidic Res 1999. 40: 2264-2270.Vezi acest articol prin: PubMed
7. Blanchette-Mackie, E. traficului de colesterol intracelulară: rolul de proteine NPC1. Biochim Biophys Acta 2000. 1486: 171-183.Vezi acest articol prin: PubMed
8. . Brown, M, Goldstein, J. O cale proteolitica care controlează conţinutul de colesterol de membrane, celule, si sangele Proc Natl Acad Sci Statele Unite ale Americii 1999. 96: 11041-11048.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
9. Mukherjee, S, Zha, X, Tabas, I, Maxfield, F. de distribuţie colesterol in celulele vii:. Imagistica fluorescenta cu ajutorul dehydroergosterol ca un analog al colesterolului fluorescente Biophys J 1998. 75: 1915-1925.Vezi acest articol prin: PubMed
10. . Ikonen, E. Rolurile de plute de transport lipidic în membrana pac aviz din Cell Biol 2001. 13: 470-477.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
11. Primarul, S, Sabharanjak, S, Maxfield, F. Colesterol-dependente de retenţie al GPI-ancorat proteine în endosomes. EMBO J 1998. 17: 4626-4638.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
12. Fielding, C, Fielding, p. celulară eflux colesterol. Biochim Biophys Acta 2,001. 1,533: 175-189.Vezi acest articol prin: PubMed
13. Brown, D, Londra, E. Structura şi funcţia de salvare membranei sphingolipid-colesterol şi bogate. J Biol Chem doi mie. 275: 17221-17224.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
14. Maxfield, FR. Plasma microdomains membrană. pac aviz din Cell Biol 2002. 14: 483-487.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
15. . Pelkmans, L, Puntener, D, Helenius, A. polimerizare Actin de localitate şi de recrutare în dynamin SV40-induse de internalizare a caveolae Stiinta 2002. 296: 535-539.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
16. Thomsen, P, Roepstorff, K, Stahlhut, M, van Deurs, B. Caveolae sunt extrem de microdomains imobil membranei plasmatice, care nu sunt implicate în traficul de persoane endocytic constitutiv. Mol Biol Cell 2002. 13: 238-250.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
17. . Ikonen, E, Parton, R. Caveolins şi echilibrul colesterolului celulare Trafic 2000. 1: 212-217.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
18. Boesze-Battaglia, K, Clayton, S, Schimmel, R. redistribuire în cadrul colesterol membranei plasmatice umane trombocite:. Probe pentru un eveniment stimul dependent de Biochimie 1996. 35: 6664-6673.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
19. Schroeder, F, et al. Recentele progrese în microdomains membrana: plute, caveolae, şi a traficului de colesterol intracelular. Exp Biol Med 2001. 226: 873-890.
20. Frolov, A, Woodford, JK, Murphy, EJ, Billheimer, JT, Schroeder, F. spontane si proteine-mediate de transfer de steroli dintre membranelor intracelulare. J Biol Chem 1,996. 271: 16075-16083.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
21. . Stocco, D. STAR proteine şi de reglementare a biosintezei hormoni steroizi Annu Rev Physiol 2001. 63: 193-213.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
22. Strauss, J, et al. Proteină steroidogene acută de reglementare (STAR):-o fereastră în complexitatea traficului de colesterol intracelular. Prog recente Horm Rezoluţia 1999. 54: 369-394.Vezi acest articol prin: PubMed
23. Lange, Y. celula colesterol Urmărire cu colesterol oxidaza. J lipidic Res 1992. 33: 315-321.Vezi acest articol prin: PubMed
24. Schroeder, F, Olanda, J, Bieber, L. dovezi fluorimetrice pentru legarea de colesterol pentru a complexului filipin. J Antibiot (Tokyo), 1971. 24: 846-849.Vezi acest articol prin: PubMed
25. Steer, CJ, Bisher, M, Blumenthal, R, Steven, AC. Detectarea de colesterol membrană de filipin in vezicule izolate ficat de şobolan filmate depinde de eliminarea unui strat clathrin. Cell J Biol 1984. 99: 315-319.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
26. Frolov, A, et al. Lipoproteine cu densitate ridicată de absorbţie-mediată de colesterol şi de direcţionare pentru a picaturile lipide în intacte L-celule fibroblaste. O abordare unică şi multiphoton fluorescenţă. J Biol Chem 2000. 275: 12769-12780.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
27. Wüstner, D, Herrmann, A, Hao, M, Maxfield, FR. De transport nonvesicular rapidă a steroli dintre domeniile membranei plasmatice a celulelor hepatice polarizate. J Biol Chem 2,002. 277: 30325-30336.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
28. . Ohvo-Rekila, H, Åkerlund, B, Slotte, ciclodextrina-catalizat de extracţie J. de steroli fluorescente din membranele monostrat şi vezicule mici unilamellar Chem Lipide Phys 2 mie. 105: 167-178.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
29. Neufeld, EB, et al. Traficului intracelular de colesterol monitorizate cu o ciclodextrină. J Biol Chem 1996. 271: 21604-21613.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
30. . Haynes, M, Phillips, M, Rothblat, G. eflux a colesterolului din piscine diferite celulare Biochimie 2000. 39: 4508-4517.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
31. Connolly, C, Futter, C, Gibson, A, Hopkins, C, Cutler, D. de transport în şi în afara complexului Golgi studiate de celule transfecting cu cDNAs codare peroxidaza de hrean. J Cell Biol 1,994. 127: 641-652.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
32. Heino, S, et al. Dissecting rolul complexului Golgi şi salvare de lipide în transporturi biosintetică de colesterol la suprafata celulelor. Proc Natl Acad. Sci Statele Unite ale Americii 2000. 97: 8375-8380.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
33. . Jefcoate, C. cu flux ridicat de trafic colesterol mitocondriale, o funcţie de specialitate ale cortexului suprarenal J Clin Invest 2,002. 110: 881-890. doi: 10.1172/JCI200216771.Vezi acest articol prin: JCI.org PubMed
34. Soccio, R, et al. Colesterol-reglementate gena codifica un StarD4 STAR proteina legata de transferul de lipide, cu două omologii strâns legate, StarD5 şi StarD6. Proc Natl Acad. Sci Statele Unite ale Americii 2002. 99: 6943-6948.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
35. Alpy, F, et al. Steroidogene acută de reglementare proteine omologul MLN64, o întârziere endosomal colesterol-legare de proteine. J Biol Chem 2001. 276: 4261-4269.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
36. Putney, J. "Kissin 'verişorii": intim plasma membrana-ER interacţiuni stau la baza intrării de calciu capacitative. Cell 1999. 99: 5-8.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
37. Ladinsky, M, Mastronarde, D, McIntosh, J, Howell, K, Staehelin, L. structura Golgi în trei dimensiuni: descoperiri funcţionale din celule normale rinichi de şobolan. J Cell Biol 1999. 144: 1135-1149.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
38. Khelef, N, et al. Îmbogăţirea de acil-coenzima A:. Colesterolului O-acyltransferase lângă trans-Golgi reţea şi compartiment de reciclare endocytic Arterioscler Thromb Vasc Biol 2000. 20: 1769-1776.Vezi acest articol prin: PubMed
39. Fielding, C, Bist, A, Fielding, p. transportul colesterolului intracelular în fibroblasti sincronizate pielea umană. Biochimie 1999. 38: 2506-2513.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
40. Uittenbogaard, A, Smart, Palmitoylation E. caveolin-1 este necesară pentru legarea colesterolului, formarea Chaperone complexe, precum şi transportul rapid de colesterol la caveolae. J Biol Chem 2000. 275: 25595-25599.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
41. M mohorâtă,, et al. Pierdere de defecte caveolae, disfunctie vasculare, pulmonare şi în caveolin-1 gena-perturbate soareci. Ştiinţa 2001. 293: 2449-2452.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
42. Razani, B, et al. Caveolin-1-deficit de soareci sunt slaba, rezistente la dieta induse de obezitate, arată şi hipertrigliceridemie cu anomalii adipocite. J Biol Chem 2002. 277: 8635-8647.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
43. Ostermeyer, A, et al. Acumularea de caveolin în reticulului endoplasmatic redirecţionează de proteine pentru a picaturile Depozit de lipide. J Cell Biol 2,001. 152: 1071-1078.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
44. Urbani, L, Simoni, RD. Colesterolul şi stomatită veziculoasă de proteine G virusului intra pe rute separate de reticulului endoplasmatic pentru a membranei plasmatice. J Biol Chem 1990. 265: 1919-1923.Vezi acest articol prin: PubMed
45. Skiba, PJ, Zha, X, Maxfield, FR, Schissel, SL, Tabas, I. cale distale de lipoproteine cu induse de esterificare colesterolului, dar nu sphingomyelinase induse de esterificare colesterolului, este dependentă de energie. J Biol Chem 1996. 271: 13392-13400.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
46. Zha, X, et al. Tratament sphingomyelinase induce ATP-independent endocytosis. Cell J Biol 1998. 140: 39-47.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
47. . Lange, Y, Ye, J, Rigney, M, Steck, T. libera colesterol în celule Niemann-Pick de tip C şi în celule tratate cu amphiphiles J Biol Chem 2,000. 275: 17468-17475.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
48. Kobayashi, T, et al. Membrane târziu endosomal bogat in acid lysobisphosphatidic reglementa transportul colesterolului. Nat Cell Biol 1999. 1: 113-118.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
49. Davies, J, Chen, F, Ioannou, Y. activitate pompa transmembranară moleculară de Niemann-Pick C1 proteine. Ştiinţa 2000. 290: 2295-2298.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
50. Cruz, J, Sugii, S, Yu, C, Chang, T. Rolul de Niemann-Pick de tip C1 în traficul de proteine intracelulare de lipoproteine cu densitate mică-derivate din colesterol. J Biol Chem 2000. 275: 4013-4021.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
51. AR înalt,, Costet, P, Wang, N. regulament şi mecanismele de eflux colesterol macrofage. J Clin Invest 2,002. 110: 899-904. doi: 10.1172/JCI200216391.Vezi acest articol prin: JCI.org PubMed
52. Wang, N, Silver, D, Thiele, C, Tall, A. ATP-obligatoriu transport casetă A1 (ABCA1), funcţionează ca o proteina de eflux colesterol de reglementare. J Biol Chem 2001. 276: 23742-23747.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
53. Wang, N, Silver, D, Costet, P, Tall, A. obligatorii specifice de ApoA-I, eflux colesterol îmbunătăţită, şi a modificat morfologia membranei plasmatice în celulele exprima ABC1. J Biol Chem 2000. 275: 33053-33058.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
54. Havel, R. resturilor chylomicron: receptorii hepatică şi metabolismul. pac Lipidol aviz din 1995. 6: 312-316.Vezi acest articol prin: PubMed
55. Vance, J, Vance, D. asamblare Lipoprotein şi secreţia de către hepatocite. Annu Rev Nutr 1990. 10: 337-356.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
56. Kang, S, Davis, R. colesterol şi hepatică de asamblare şi secreţia de lipoproteine. Biochim Biophys Acta 2000. 1529: 223-230.Vezi acest articol prin: PubMed
57. Zegers, M, Hoekstra, D. Mecanisme şi caracteristicile funcţionale ale traficului membranei polarizate în celulele epiteliale şi hepatice. Biochem J 1998. 336: 257-269.Vezi acest articol prin: PubMed
58. Tabas, I. colesterol si metabolismul fosfolipide în macrofage. Biochim Biophys Acta două mii. 1529: 164-174.Vezi acest articol prin: PubMed
59. Tabas, I. modificări Nonoxidative de lipoproteine în aterogeneză. Annu Rev Nutr 1999. 19: 123-139.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
60. Sakr, S, et al. De absorbţie şi de degradare a matricei obligat-lipoproteinele de macrofage nevoie de o citoscheletului Actin intact, GTPases Rho familie, şi ATPase miozinei activitate. J Biol Chem 2001. 276: 37649-37658.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
61. Xu, XX, Tabas, lipoproteine I. activa acil-coenzima A: colesterol acyltransferase în macrofagele numai după bazine celulare colesterolului sunt extinse până la un nivel prag critic. J Biol Chem 1991. 266: 17040-17048.Vezi acest articol prin: PubMed
62. Kallen, C, et al. Steroidogene proteine acută de reglementare (STAR) este o proteina de transfer de steroli. J Biol Chem 1998. 273: 26285-26288.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
63. Hall, P, Almahbobi, Rolurile G. de microfilaments şi filamente intermediare în steroidogenezei suprarenale. Microsc Res Tech 1997. 36: 463-479.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
64. Papadopoulos, V, et al. Periferică receptorilor benzodiazepinici de transport în colesterol şi steroidogenezei. Steroizi 1997. 62: 21-28.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
65. Arakane, F, et al. Mecanismul de acţiune al steroidogene proteine de reglementare acută (STAR). STAR acţionează pe partea exterioară a mitocondriilor pentru a stimula steroidogenezei. J Biol Chem 1,998. 273: 16339-16345.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef
66. . Bose, H, Lingappa, V, Miller, W. reglementarea rapidă a steroidogenezei de import de proteine mitocondriale Natura 2,002. 417: 87-91.Vezi acest articol prin: PubMed CrossRef