Fază solidă peptide sinteza

SPPS este abordarea rapid si simplu la sintetizarea peptide şi proteine ​​mici. Acidul C-terminal amino este ataşat la o răşină polistiren reticulat printr-o legătură instabil în mediu acid cu o molecula de linker-ul. Aceasta rasina este insolubil în solvenţi utilizate pentru sinteza, acest site este relativ simplu şi rapid să spele reactivii exces şi subproduse. N-terminal este protejat cu grupul Fmoc, care este stabil în acid, dar amovibil de bază. Orice grupe laterale lanţ funcţionale sunt protejate cu grupuri stabile de bază, acid labil.

Descriere chimică

Pentru a începe fiecare cuplare, grupul Fmoc pe răşină obligat aminoacizi / peptida este eliminat cu piperidină 20% în N, N-dimetil formamidă (DMF). Acesta este apoi clătită şi un acid amino protejate este adăugată pe care a fost activat la ei "alfa" grupul carboxilice. Activarea se realizează prin crearea N-hydroxybenzotriazole (HOBt) ester in situ. AA activat şi răşină legat AA li se permite să reacţioneze în prezenţa de bază pentru a forma o legătură peptide nou. Acest proces este repetat până peptida dorit este asamblat la răşină.

Odată ce peptida este completă, aceasta este gata pentru a fi desfăcut din rasina. Acest lucru se realizeaza cu ajutorul unui amestec de acid trifluoroacetic (TFA) şi scavangers. Scavangers servesc la neutralizarea cationii care se formează în timpul eliminarea lanţului lateral protejarea categoriilor. Soluţia este de cel puţin 82% TFA, iar restul dintr-un amestec de thioanisol fenol, apă, ethanedithiol (EDT), şi triisopropylsilane (TIS). Peptida de pe rasina este permis să reacţioneze cu amestecul de clivaj pentru câteva ore, care permite apoi peptida în soluţie. Acesta poate fi apoi precipitat şi se spală în terţ eter metil-butil, şi analizate sau purificat după cum doriţi.