Back to site
Since 2004, our University project has become the Internet's most widespread web hosting directory. Here we like to talk a lot about web development, networking and server security. It is, after all, our expertise. To make things better we've launched this science section with the free access to educational resources and important scientific material translated to different languages.

Cromatografie

Source: http://people.rit.edu/pac8612/webionex/website/html/ione8ho9.html

Cromatografie este un proces de separare care implică de partiţionare o proteina (sau orice alt analit solubil) între o insolubil faza staţionară şi o fază mobilă care trece peste suprafaţa sa. Un simplu, dar complet, sistem de cromatografie este prezentată în diagrama de mai jos.

Cromatogramă: înregistrarea de o separare produsă de un înregistrator de integrator sau bazate pe semnalul obţinut de la detector.

T m: timpul necesar pentru faza mobilă de a călători în întreaga lungime a coloanei. De exemplu, în cazul în care coloana are un volum total de 100 ml şi faza staţionară ocupă 40 ml, apoi faza mobilă ocupă cel puţin 60 ml. În cazul în care faza mobilă au fost curge la o rată de 5 ml / min, atunci ar lua 12 min pentru faza mobilă de a călători de la injector la detector prin coloană. Nu m poate fi, uneori, determinat prin identificarea un vârf mic devreme în cromatogramă rezultă dintr-un solvent uşor diferită în pauza mobil care vine din eşantion injectat. Nu m poate fi determinată, de asemenea, prin verificarea în momentul eluţia o probă care nu sunt reţinute de fază staţionară la toate. În cazul în care o răşină de schimb cationic, o proteină incarcate negativ ar putea fi folosite pentru a determina t m. De asemenea, trebuie remarcat faptul că alţi factori, inclusiv lungimea şi diametrul de tuburi care se conecteaza la injectorului şi detectorului la coloana ar putea afecta t m valori.

Atunci când o analit de orice fel este în curs de cromatografie, se misca in acelasi ritm ca fază mobilă atunci când acesta este în faza mobilă şi este staţionar atunci când este legat la faza staţionară. Cu alte cuvinte, toate analizate petrece echivalent normă de t m în faza mobilă. Diferenţele în valoare de timpul petrecut legate la faza staţionară le permite să fie separate unele de altele.

T R: timpul de retenţie, sau timpul necesar pentru o proteina de a eluează dintr-o coloană.

T r ": timpul de retenţie ajustat, care descrie cantitatea de timp petrecut de proteine ​​legat de faza staţionară în timpul o separare.

K ': factorul de capacitate, pot fi determinate prin ecuaţia de mai jos. "K este folosit pentru a compara comportamentul cromatografice a unui analit pe aceeaşi coloană, atunci când acesta este ataşat la două sisteme diferite. În acest caz, t m, valorile pot varia în funcţie, dar valorile k "ar trebui să rămână aceleaşi. Factorul de capacitate indică, de asemenea, numărul de volume coloana de pauza mobile care trebuie să fie utilizate pentru a eluează unui analit. A k "valoarea 1 indică faptul că 2 volume coloană de fază mobilă trebuie să fie utilizate, în timp ce AK" valoarea din 5 indică faptul că volume de 6 coloană trebuie să fie utilizate.

V R: volumul de retenţie este proporţională cu timpul de retenţie, pe baza debit constant de un sistem de cromatografie. În cazul în care timpul de retenţie este de 5 min, iar debitul de volum (u v) este de 5 ml / min, atunci V r este de 25 ml.

V m: volumul faza mobilă (de asemenea cunoscut si ca volum nule)

De retenţie relativă (o): raportul dintre factorii de capacitate (k) sau ori de retenţie ajustat (t r) pentru două substanţe de analizat. Prin convenţie, o.> 1

Rezolutie: gradul de separare între două analizate pe un sistem de cromatografie. În cele de mai sus cromatogramă, compus A şi B compus se spune ca sunt "de bază rezolvat" întrucât B şi C compus combinate nu sunt bine rezolvate. Rezoluţia poate fi calculat din ecuaţia de mai jos.

în cazul în care w ave este media dintre cele două lăţimi de vârf în unităţi de timp. O a doua ecuaţie de rezoluţie este util pentru valoarea sa predictivă în proiectarea separaţii:

unde N este numărul de plăci teoretice pentru separare.

Published (Last edited): 06-11-2011 , source: http://people.rit.edu/pac8612/webionex/website/html/ione8ho9.html